シークエンス　方法1

1. 氷上で、8連チューブに次の試薬を加える。

plasmid	150-300ng
1uM Primer	3.2ul
BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing RR-100 (AB, 4336911)	8ul
超純水	up to 20ul
Total	20ul

2. 次のプロトコルでPCRをかける(-30℃で保存可)

96℃	1min
96℃	10sec	↓
50℃	5sec
60℃	4min	↑25サイクル
16℃	∞

3. 3M NaOAc (pH 5.2) (nacalai, 31138-31) 2ul、0.5M EDTA (pH 8.0) 0.5ul、MilliQ 1.5ulを1.5mlチューブに分注しておき、サンプルを加える(-30℃で保存可)。
4. エタノール(nacalai, 14713-95) 50ulを加え、vortexし、室温で15min (遮光し、4℃で保存可)。
5. 20400g, 4℃, 20minで遠心し、上清を除く。
6. 70%EtOH 70ulを加え、遠心20400g, 4℃, 5minし、上清を除く。
7. Centrivap concentrator (Labconco)で10min減圧乾燥する。
8. Hi-Di Formamide 20ulを加え、vortexしながら室温で溶解する(遮光して4℃で保存可)。
9. 8連チューブに番号を振り、サンプルを移し、アルミホイルで包む。
10. サンガーシークエンスオンライン受付に移動し、申し込む(サンプル名は、スペース不可)。
11. メールに記載された受付番号を記した紙と一緒に、サンプルを袋に入れ、提出する。
12. .ab1ファイルをSequence Scanner Software 2で開き、波形を確認する
13. ClustalWで解析する。