siRNA導入　electroporation　1サンプル

1. ピペットマンとチップをUVで30min滅菌。
2. Nucleofector IをT20に設定しておく。
3. Nucleofector Solutionを調製し、室温に置いておく。
4. 15mlチューブにメディウム4mlを入れておく。
5. 15mlチューブに、harvest用のメディウムを分注しておく。
6. 6ウェルプレートを用意しておく。
7. H295R 10cm 2枚にトリプシン/EDTA 1mlを加え、メディウム3mlで中和し、50mlチューブに回収する。
8. ピペットを底に付けてピペッティング3回し、細胞数を数える。
9. 5x10^6個を15mlチューブに分注し、130g, 5minで遠心し、上清を除き、Nucleofector Solution 100ulを加え、良くピペッティング。
10. 100uM siRNA 4ulを加え、キュベットに移し、蓋をする。
11. Nucleofector Iにキュベットを挿入し、パルスをかける。
12. メディウム500ulを加え、駒込ピペットで、メディウムの入った15mlチューブに移す。
13. 手順7-9を繰り返す。
14. 2mlずつ6ウェルプレートに移す。