siRNA導入　electroporation　複数サンプル　1ウェル/サンプル

1. ピペットマンとチップをUVで30min滅菌。
2. Nucleofector IをT20に設定しておく。
3. 100uM siRNAをon iceにしておく。
4. Nucleofector Solutionを調製し、室温に置いておく。
5. Collagen-coated 24well (Iwaki, 4820-010)にメディウムを500ulずつ加え、インキュベータに入れておく。
6. 50mlチューブに、harvest用のメディウムを分注しておく。
7. H295R 10cm 5枚にトリプシン/EDTA 1mlを加え、メディウム3mlで中和し、50mlチューブ2本に回収する。
8. ピペットを底に付けてピペッティング3回し、50mlチューブに合わせ、細胞数を数える。
9. 5x10^6ずつ15mlチューブ4本に分注し、130g, 5minで遠心し、上清を除く。
10. Nucleofector Solution 100ulを加え、ピペッティング40回。
11. 100uM siRNA 4ulを加え、キュベットに移し、蓋をする。
12. Nucleofector Iにキュベットを挿入し、パルスをかけ、メディウム500mlを加える。
13. 手順10-12を繰り返す。
14. 駒込ピペットで、メディウムの入った24ウェルに移す。