組織免疫染色　手順

1. パラフィン切片をキシレンに浸け、10min。
2. 別のキシレンに浸け、10min。
3. 100%EtOHに浸け、5min。
4. 別の100%EtOHに浸け、5min。
5. 90%EtOHに浸け、5min。
6. 80%EtOHに浸け、3min。
7. 70%EtOHに浸け、3min。
8. 流水に浸け、5minし、キムタオルで拭く。
9. タッパーにスライドグラスを横向きに寝かせ、Target Retrieval Solution (DAKO, S2368)に浸し、蓋をする。
10. 温度測定棒を底面まで、とエアの棒を液の中間まで挿入する。
11. 電源ON→エアON→レバーを熱電対にセット→出力を5に→照射タイマー、照射・停止ボタンをON
12. 終了したら底板ごと取り外し、冷めるまで待つ。
13. Target Retrieval Solutionを回収する(2-3回使える)。
14. PBSに浸け、5min。
15. 別のPBSに浸け、5min。
16. 別のPBSに浸け、5min
17. メタノール120ml、30%H2O2 4mlを容器に入れ、スライドグラスを浸し、30min。
18. PBSに浸け、5min。
19. 別容器のPBSに浸け、5min。
20. 別容器のPBSに浸け、5min。
21. 一次抗体を1%BSA/PBSで300倍希釈する。
22. 抗体反応用箱の底に紙を敷いて水にぬらす。
23. 切片周囲の水をキムワイプで拭きとり、切片をDako Penで囲み、一次抗体希釈液200ulをかけ、1hr。
24. PBSに浸け、5min。
25. 別容器のPBSに浸け、5min。
26. 別容器のPBSに浸け、5miin。
27. 水をキムワイプで吸い取り、Envision (Dako, K4002) 2滴を垂らし、30min。
28. PBSに浸け、5min。
29. MilliQ 3mlにLiquid DAB Substrate KitのA液3滴、B液6滴、C液3液を加え、遮光してon ice。
30. 別容器のPBSに浸け、5min。
31. 別容器のPBSに浸け、5min。
32. DAB 200ulを滴下し、5min。
33. 流水で10min。
34. メチルグリーンに10min浸し、水に浸け、別容器の水に浸ける。
35. 脱水し、100%EtOHに浸け、5min。
36. 別容器の100%EtOHに浸け、5min
37. キシレンに浸け、数回振とうする。
38. 別容器のキシレンに浸け、3min。
39. 別容器のキシレンに浸け、3min。
40. カバーグラスにMount Quick 2滴を垂らし、封入して乾燥させる。
41. しばらくしたら、重りを乗せる。