Srebf1　共免疫沈降　実験2

細胞
　種類：HEK293T
　前日：1.7 x 10^6/10cm, インキュベート24hr
　当日：90% confluent
トランスフェクション
　・プラスミド：7.5ug each/dish
　　・pcDNA3.1
　　・pcDNA3.1-FLAG-mnSrebf1
　　・pcDNA3.1-myc-His
　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His
　　・pcDNA3.1-mPrdx1-myc-His
　　・pcDNA3.1-mAcly-myc-His
　・lipofectamine 2000
　　・量：40ul/dish
　　・時間：4hr
　・培養時間：30hr
免疫沈降
　・ビーズ：20ul slurry
　・時間：6hr
　・洗浄：4回
　・溶出：FLAG peptide
ウェスタンブロット
　・ゲル
　　・10% (ATTO, E-T10L)
　　・5-20% (ATTO, E-T520L)
　・一次抗体：4℃, over night
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, Lot：093K9158), 1/1000希釈
　　・Myc-tag (9B11) mAb (Cell Signaling, 2276, Lot：24), 1/1000希釈
　　・Myc-Tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040), 1/1000希釈
　・二次抗体
　　・anti-mouse IgG (GE, NA931V, Lot：16826090), 1/2000希釈