Srebf1　ユビキチンアッセイ　実験2

細胞：HEK293T (10cm)
　密度：1.6 x 10^6/dish→20hr後、80% confluent
トランスフェクション
　・プラスミド
　　・pRK5-HA-Ubiquitin WT, 3.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG-mArmc5, 3.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG-mnSrebf1, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-myc-His, 3ug/dish
　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His, 3ug/dish
　　・時間：4hr
処理：トランスフェクション24hr後から、10uM MG132, 5hr
ウェスタンブロッティング
　・一次抗体：4℃, over night
　　・anti-HA (262K) (Cell Signaling, 2362, Lot: 4), 1/1000希釈
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, Lot: 093K9158), 1/2000希釈
　　・Myc-tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040, Lot: 4), 1/1000希釈
　・二次抗体：anti-mouse Ig (GE, NA931V, Lot: 17041904), 1/2000希釈