Srebf2　共免疫沈降

細胞
　・HEK293T
　・前日：1.6 x 10^6/10cm, インキュベート18hr
　・当日：60% confluent
トランスフェクション
　・プラスミド：7.5ug each/10cm
　　・pcDNA3.1-FLAG
　　・pcDNA3.1-FLAG-nmSrebf1
　　・pcDNA3.1-FLAG-nmSrebf2
　　・pcDNA3.1-FLAG-mArmc5
　　・pcDNA3.1-FLAG-mArmc5ΔC
　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc
　　・pcDNA-Myc-Cul3
　・試薬：lipofectamine 2000, 40ul/10cm
　・時間：4hr
　・培養時間：32hr
　・viability：中等度の死細胞
免疫沈降
　・Lysis Buffer：500ul/10cm
　・蛋白分解阻害剤：Proteinase Inhibitor Cocktail (Nacalai)
　・FLAG beads：20ul slurry
　・免疫沈降時間：3hr
　・洗浄：4回
　・溶出：FLAG peptide, 40ul
ウェスタンブロット
　・抗体：4℃, over night
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, Lot: 093K9158), 1/2000希釈
　　・Myc-tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040, Lot: 4), 1/1000希釈