TB Green Fast qPCR Mix　3ステップPCR

1. LightCycler 96 Systemを予約する。
2. 以下の試薬を混ぜる。

SYBR Fast qPCR Mix	10ul
50uM Primer 1	0.16ul
50uM Primer 2	0.16ul
超純水	7.68ul
Total	18ul

3. LightCycler 480 Multiwell Plate 96, white (Roche, 04729692001) or FrameStar 96 well (4titude, 4ti-0950/C)に室温で分注。
4. cDNA 2ulを加える。
5. シールし、遠心3分以上し、LightCycler 96を立ち上げる。
6. Eject→プレートをセット。
7. NEW→New experiment based on Roche Template→鉛筆ボタン→RunTemplate_SYBR_Amp_Melt→OK
8. ファイル名入力→Create→Profile→以下の様に項目を修正→Start

95℃	30sec
95℃	5sec	↓
60℃	30sec
72℃	30sec	↑ 45 cycle

9. Overview→ファイルを選択→USBを挿す→Synchronize→抜く
10. Eject→プレートを捨てる→Exit
11. LightCycler 96 Softwareでファイルを開く(ファイルにアクセスできない場合は、他のPCで開き、上書き保存する)。
12. Sample Editor→不要なウェルをClear Wellsで除く。
13. Gene→名前を入力→ウェルを指定。
14. Standardのウェルを選択→Auto Standard Curve→Highest Concentration、Dilution Factorを入力→OK
14. Analysis→Add Analysis→OK
15. Positionをクリックしてソート→Excelにコピーペースト