THUNDERBIRD SYBR qPCR Mixを用いたLight Cycler

1. 標準曲線用DNAをMilliQで3-4点分希釈する(標準曲線用DNAが無い場合は、測定サンプルのいくつかを混ぜたものを用いると良い)
2. 冷蔵庫で冷やしたLightCycler Centrifuge Adapters上で、以下の試薬を混ぜる。

		終濃度
THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix (Toyobo, QPS-201)	10ul
50uM Primer 1	0.12ul	0.3uM
50uM Primer 2	0.12ul	0.3uM
MilliQ	7.76ul
Total	18ul

3. LightCycler Centrifuge AdaptersにLight Cycler Capillariesをセットする
4. 操作2で調製した試薬を分注し、DNA溶液2ulを加える
5. 専用遠心機(TOMY, AR005-24)を用いて遠心800g, 4℃, 1min
6. Capillariesに蓋をセットする
7. LightCyclerを以下のように設定し、PCRをかける
　・PCR (cDNA定量の時)

95℃	30sec
95℃	5sec	↓
65℃	5-10sec
72℃	30sec	↑40-50 Cycle

　・PCR(クロマチン免疫沈降の時)

95℃	30sec
95℃	20-30sec	↓
65℃	20-30sec
72℃	30sec-1min	↑50サイクル

8. 標準曲線がほぼ直線になっている事、解離曲線がsingle peakであることを確認する。
9. 標準曲線のSlopeから増幅効率を算出し、100%に近い事を確認する(増幅効率=50*10^(-1/Slope))。