THUNDERBIRD Next SYBR qPCR Mix

1. LightCycler 96 Systemを予約する。
2. 以下の試薬を混ぜる。

THUNDERBIRD Next SYBR qPCR Mix	10ul
50uM Primer 1	0.12ul
50uM Primer 2	0.12ul
超純水	7.76ul
Total	18ul

3. LightCycler 480 Multiwell Plate 96, white (Roche, 04729692001) or LightCycler 480 Multiwell Plate 96, clear (Roche, 05102413001)に室温で分注。
4. cDNA 2ulを加える。
5. シールし、遠心3分以上し、LightCycler 96を立ち上げる。
6. Eject→プレートをセット。
7. NEW→New experiment based on Roche Template→鉛筆ボタン→RunTemplate_SYBR_Amp_Melt→OK
8. ファイル名入力→Create→Profile→以下の様に項目を修正→Start

95℃	30sec
95℃	5sec	↓
60℃	15sec
72℃	45sec	↑45 Cycle

9. Overview→ファイルを選択→USBを挿す→Synchronize→抜く
10. Eject→プレートを捨てる→Exit
11. LightCycler 96 Softwareでファイルを開く(ファイルにアクセスできない場合は、他のPCで開き、上書き保存する)。
12. Sample Editor→不要なウェルをClear Wellsで除く。
13. Gene→名前を入力→ウェルを指定。
14. Standardのウェルを選択→Auto Standard Curve→Highest Concentration、Dilution Factorを入力→OK
14. Analysis→Add Analysis→OK
15. Positionをクリックしてソート→Excelにコピーペースト