PHF2の免疫沈降
結論
・rabbit anti-ヒト蛋白PはHEK293Tの内因性蛋白PはIPできるが、3T3-L1
adipocyteの内因性蛋白Pに対してはIP効率が落ちる。
Lane 1
細胞:HEK293T (100%コンフルエント), 9cmディッシュ1枚
免疫沈降
抗体:rabbit anti-ヒト蛋白P, 2.2ug
コンタクト時間:2hr
担体:Protein G sepharose 4 Fast Flow (GE, 17-0618)
ローディング量:9cmディッシュ1/8枚分
Lane 2
細胞:3T3-L1 (分化誘導後5日目, 分化率90%), 9cmディッシュ3/5枚
免疫沈降
抗体:rabbit anti-ヒト蛋白P, 2.2ug
コンタクト時間:overnight
担体:Dynabeads Protein G (Invitrogen, 100.09D)
ローディング量:9cmディッシュ3/40枚分
ゲル濃度:8%
ウェスタンブロット
一次抗体:rabbit anti-ヒト蛋白P, 0.44ug/ml
二次抗体:anti-rabbit Ig (Dako, P0448), 1/3000希釈
フィルムとのコンタクト:1min
