SREBF1核内結合因子取得 実験4

細胞:3T3-L1-TetON-FLAG-mnSrebf1 (80%分化, Day4), 15cmディッシュ30枚
薬剤処理:10ug/ml Doxycycline, 30hr
顕微鏡所見
 ・Dox処理群に死細胞多数
核抽出
 ・ペレット量
  ・Dox(-):3ml
  ・Dox(+):1.6ml
 ・蛋白量/濃度
  ・Dox(-):10.8mg, 2.03mg/ml
  ・Dox(+):6.0mg, 2.51mg/ml
免疫沈降
 ・ビーズ量:40ul slurry
 ・反応時間:4時間
 ・洗浄:Buffer Dで7回→Elute Bufferで3回




Total Spectrum Count
Srebf2とのGI (17804遺伝子中) (文献)
特徴
遺伝子
Dox(-)
Dox(+)


Gcn1l1
0
66

リボソーム関連
Srebf1
1
45

bait
Crebbp
0
32

CBP
Prkdc
0
23

DNA-PK。PI3K family。肥満に関連(Cell Metab., 2017)
EP300
0
21


Kpnb1
0
15
negative, 2083位
importin family
Armc5
0
15
negative, 64位
Grn
0
14
positive, 2347位
Granulin。前頭側頭型認知症の責任遺伝子
Supt16
0
11

FACT complex subunit
Prdx1
0
10
positive, 36位
結合しない
Acly
0
9

FLAGビーズに結合
Pfkm
0
9

phosphofructokinase
Ddb1
0
9
negative, 1459位
E3 ligase complex
Bag6
0
9

Bat3。chaperone?
Acsl1
0
9

acyl-CoA synthetase
Csnk2a1
0
8

casein kinase
Gapdh
0
7


Iqgap1
0
7
negative, 5345位
インスリンシグナル制御。IR、IRS1に結合
Ruvbl1
0
6

DNA helicase
Ehd2
0
4

カベオラ形成
Ilf3
0
4

NFAT
Pcna
0
4


Ptov1
0
4
positive, 403位
核内因子。機能不明
Ambra1
0
3
negative, 3340位
オートファジー関連
Fbxw7
0
3
positive, 3位

Klhdc2
0
3
negative, 976位
kelch domain containing。核内因子。機能不明
Wdr5
0
3

HMT complex
Zwint
0
3
positive, 6967位
機能不明。核内因子
Cebpb
0
1


Kdm1a
0
1

ネガコンにも結合

ウェスタンブロット
 ・ゲル:5-20% (ATTO, E-T520L)
 ・ローディング量
  ・免疫沈降サンプルの1/6量
  ・Srebf1共免疫沈降実験2のLysate 1/500〜1/50000量
 ・一次抗体:PRDX1 antibody (Proteintech, 15816-1-AP), 1/1000希釈, 4℃, over night
 ・二次抗体:anti-rabbit Ig (GE, NA934V, Lot 16885523), 1/2000希釈
 ・発光:Pierce ECL Plus Western Blotting Substrate
 ・検出:Standard, 2min