〇細胞蛋白抽出　RIPA Buffer　チューブでwash　9cmディッシュ

1. 遠心機を4℃にしておき、氷、セルスクレイパー、1.5mlチューブ、(液体窒素)を用意する。
2. PBSを調製し、on ice。
3. 培地をアスピレートし、PBS 1mlを加え、4℃に入れる。
4. 細胞をセルスクレイパーで1.5mlチューブに回収し、on ice。
5. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除く。
6. PBS 1mlを加え、タッピング。
7. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除き、on ice (液体窒素→-80℃で保存可)
8. 冷やしたRIPA Buffer (protease inhibitor +) 300-500ulを加え、ピペッティング。
9. Output 3でsonication 5-10回。
10. 遠心12000g, 4℃, 10minし、上清270-450ulを回収。
11. (必要に応じ) RIPA Bufferで5-10倍希釈し、蛋白定量し、濃度を合わせる。
12. 4xサンプルバッファーを90ul加え、インキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)。