〇細胞蛋白抽出　RIPA Buffer　ディッシュ上でwash

10cm【6cm】『6ウェル』の場合

1. 遠心機を4℃にし、スクレイパー、1.5mlチューブを準備する。
2. 培地をアスピレートし、PBS 【2ml】『1ml』でwash。
3. PBSをアスピレートし、PBS 1ml【500ul】『250ul』を加える。
4. 細胞をセルスクレイパーで1.5mlチューブに回収し、on ice。
5. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除く。
6. PBS 1ml【500ul】『500ul』を加え、タッピング。
7. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除き、on ice (-80℃に保存可)。
8. 冷やしたRIPA Buffer (protease inhibitor +) 500ul-1ml【100-400ul】『70-100ul』を加え、ピペッティング。
9. Output 3でsonication 5-10回。
10. 遠心12000g, 4℃, 10minし、上清を回収。
11. (必要に応じ) RIPA Bufferで4-10倍希釈し、蛋白定量し、濃 度を合わせる。
12. 4xサンプルバッファーを1/3量加え、インキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)。