〇細胞蛋白抽出　RIPA Buffer　6cmディッシュ　タンパクとRNAを抽出

1. 遠心機を4℃にしておき、氷、セルスクレイパー、1.5mlチューブを用意する。手順7で凍結する場合は、液体窒素を用意する。
2. PBSを調製し、on ice。
3. 培地をアスピレートし、PBS 500ulを加え、4℃に入れる。
4. 細胞をセルスクレイパーで1.5mlチューブに回収し、on ice。
5. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除く。
6. PBS 500ulを加え、タッピングし、RNA用に100ulを1.5mlチューブに分注する。
7. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除き、on ice (液体窒素→-80℃で保存可)。
8. RNA用チューブに、Sepasol 500ulを加え、vortex。
9. タンパク用チューブに、冷やしたRIPA Buffer (protease inhibitor +) 200ulを加え、ピペッティング。
10. Output 3でsonication 5-10回。
11. 遠心12000g, 4℃, 10minし、上清150ulを回収。
12. (必要に応じ) RIPA Bufferで5-10倍希釈し、蛋白定量し、濃度を合わせる。
13. 4xサンプルバッファーを1/3量加え、インキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)。