〇脂肪組織・肝臓からの蛋白抽出

1. 脂肪組織約100mg、肝臓約20mgをpellet pestles (Kontes, 749520-0000)に入れ、重量を測定し、液体窒素に漬ける。
2. 氷冷したRIPA(蛋白分解阻害剤+) 300ulを加え、すり潰し、on ice。
3. Sonifier 450 (Branson)で、output 3で超音波処理。
4. 脂肪組織が計20ul/mg、肝臓が計40ul/mgとなるようにRIPA(蛋白分解阻害剤+)を加え、rotate, 4℃, 15-30min。
5. 必要に応じて1.5mlチューブに移し、12000g, 4℃, 10min遠心し、脂肪組織は中間層を、肝臓は上清を回収する。
6. RIPAを用い、脂肪組織は3倍希釈、肝臓は10倍希釈し、蛋白定量する。
7. TCA/アセトン沈殿の準備をする。
8. 45ulを分注し、4xサンプルバッファー15ulを加え、インキュベート95℃, 5min。
9. 脂肪組織をTCA/アセトン沈殿する。