脂肪細胞分画とSVC分画の採取

1. 分画用メディウムを準備する。
2. Water bathを37℃にしておく。
3. 液体窒素を用意する。
4. マウスから脂肪組織を採取し、PBSで洗い、分画用メディウムに浸し、マイティーバイアル(マルエム, 200624)に入れ、on ice。
5. ハサミでミンス3-6minし、on ice。
6. 分画用メディウムで共洗いしながらデカントで50mlチューブに移し、10mlにメスアップし、on ice。
7. 遠心500g, 24℃, 5minし、上清を先切れチップで50mlチューブに移す。
8. 分画用メディウムで10mlにメスアップし、1mg/ml DNase 500ul、20000U/ml Collagenase 500ulを加え、パラフィルムを巻き、激しく振とう37℃, 30min。
10. Cell strainer 70um (Falcon, 352350)を50mlチューブにセットし、10mlピペットをつけて押し出し、遠心500g, 24℃, 5min。
11. 上清を50mlチューブに移し、ペレットを1.5mlに移す。
12. ペレットにDMEM(HEPES/phenol red free)/FBS/Abx 1mlを加え、遠心500g, 24℃, 5minし、上清を捨て、液体窒素→-80℃。
11. 上清を遠心500g, 24℃, 5minし、下層を除き、上層を1.5mlチューブに移す。
12. 遠心500g, 24℃, 5minし、下層を除き、液体窒素→-80℃