〇抗タグビーズによる免疫沈降

1. Anti-FLAG M2 Affinity Gel (Sigma, A2220)、Anti-Myc beads (Fujifilm Wako, 010-26501)、Anti-HA Affinity Matrix (Roche, 11815016001)を洗浄する。
2. input解析用に一部を分注し、サンプルバッファーを加え、イ ンキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)。
3. 先切れチップを用い、ビーズ懸濁液を蛋白溶液に加える。
4. rotation, 1hr-over night, 4℃。
5. 遠心機を4℃にしておく。
6. 必要に応じ、200ug/ml FLAG peptide、150ug/ml Mycを調製しておく。
7. 1000g, 4℃, 1minで遠心し、先切れチップと26G針を付けたアスピレーターで、針先を壁面に付けながらアスピレート
8. バッファー(蛋白分解阻害剤無し) 500ulを加え、タッピングし、1000g, 4℃, 1minで遠心し、26Gでアスピレート
9. 手順7をさらに3-6回繰り返す。
10. 溶出する。