Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit


通常法。oligo dTとrandom hexamerを用いる場合

節約法。oligo dTとrandom hexamerを用いる場合
 1. 次の試薬を氷上で混ぜる

RNA	450ng以下
Anchored-oligo[dT]18 Primer	0.5ul
Random Hexamer Prmer	1ul
H2O, PCR grade	up to 6.5ul
Total	6.5ul

2. サーマルサイクラーで65℃, 10min→4℃
3. 次の試薬を加える

Transcriptor RT Reaction Buffer (5x)	2ul
Deoxynucleotide Mix 10mM each	1ul
Protector RNase inhibitor	0.25ul
Transcriptor Reverse Transcriptase	0.25ul
Total	3.5ul

4. キャップを新しいものと交換し、25℃, 10min→50℃, 60min→85℃, 5min→4℃
5. MilliQ 20-30ulを加え、キャップを新しいものと交換する(-30℃に保存可)。

節約法。oligo dTを用いる場合
1. 次の試薬を氷上で混ぜる

RNA	450ng以下
Anchored-oligo[dT]18 Primer	0.5ul
H2O, PCR grade	up to 6.5ul
Total	6.5ul

2. サーマルサイクラーで65℃, 10min→4℃
3. 次の試薬を加える

Transcriptor RT Reaction Buffer (5x)	2ul
Deoxynucleotide Mix 10mM each	1ul
Protector RNase inhibitor	0.25ul
Transcriptor Reverse Transcriptase	0.25ul
Total	3.5ul

4. サーマルサイクラーで50℃, 1hr→85℃, 5min→4℃
5. MilliQを20ul加える
6. キャップを新しいものと交換し、-30℃で保存(熱でキャップが緩んでいる事がある)

通常法。oligo dTを用いる場合
1. 次の試薬を氷上で混ぜる

RNA	900ng以下
Anchored-oligo[dT]18 Primer	1ul
H2O, PCR grade	up to 13ul
Total	13ul

2. サーマルサイクラーで65℃, 10min→4℃
3. 次の試薬を加える。

Transcriptor RT Reaction Buffer (5x)	4ul
Deoxynucleotide Mix 10mM each	2ul
Protector RNase inhibitor	0.5ul
Transcriptor Reverse Transcriptase	0.5ul
Total	7ul

4. サーマルサイクラーで50℃, 1hr→85℃, 5min→4℃
5. MilliQを40ul加える
6. キャップを新しいものと交換し、-30℃で保存(熱でキャップが緩んでいる事がある)