脂肪組織からのSVC採取

1. コラゲナーゼ溶液20mlを調製し、37℃にしておく
2. DMEM(High)/10%FBS/Abx、DMEM(High)を37℃にしておく
3. 解剖器具を70%EtOHにつけておく
4. マウスを頸椎脱臼し、epididymal WAT、abdominal subcutaneous WATを採取し、重量を測定し、滅菌PBSに 浸す
5. クリーンベンチに移動し、滅菌PBSに移す
6. DMEM(High) 4mlに移し、解剖ばさみで10分間ミンス
7. 共洗いしながらコラゲナーゼ溶液に移し、手で回転させながら37℃, 10min
8. 二層に分離するので、下層を70umセルストレイナーを通す
9. 遠心1200rpm, 5minし、上清を除き、タッピング
10. DMEM(High)/10%FBS/Abx 10mlを加え、遠心1200rpm, 5minし、上清を除いてタッピング
11. DMEM(High)/10%FBS/Abx 4mlを加え、細胞数を数える
12. 24ウェルプレート1枚にまく
13. 2-3日に1回培地交換しながら、100%コンフルエントにし、4日間培養
14. SVC脂肪細胞分化誘導培地に置換し、4日間培養
15. SVC維持培地に置換し、培養