〇細胞蛋白抽出　TNE Buffer

9cmディッシュの場合。【】は6cmディッシュ、〔〕は6well

HEK293T
はがれにくい細胞
3T3-L1脂肪細胞

早い反応をみる場合(リン酸化シグナルなど)
1. 培地をアスピレートし、ディッシュを液体窒素に浮かべる(-80℃で保存可)
2. ディッシュをon iceにし、冷やしたTNE【400ul】〔200ul〕を加え、Cell scraper (Iwaki, 9000-220)で細胞を1.5mlチューブに回収し、on ice (セルスクレイパーは洗って使いまわす)
3. rotation, 4℃, 20min-3hrし、遠心12000g, 4℃, 10minして上清を回収する(-30℃に保存可)
4. 3xサンプルバッファーを1/2量加え、インキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)