抗体架橋による免疫沈降

1. Dynabeads Protein G (Invitrogen, 100.09D) 20ulを1.5mlチューブに分注
2. TNE 500ulで2回wash
3. 蛋白分解阻害剤入りTNE 100ulを加える
4. 抗体2ugを加え、rotate, 4℃, over night

5. 20mM DMPを調製する
6. ビーズを0.2M triethanolamine (pH 8.2) 500ulで2回wash
7. 20mM DMP 1mlを加え、rotate, 室温, 80min
8. 20mM DMPを除き、50mM Tris-HCl (pH 7.5) 1mlを加え、rotate, 室温, 50min
9. TNE 500ulで4回washし、蛋白分解阻害剤入りTNE 20ulを加える(4℃で短期間保存可)

10. 蛋白抽出液にビーズを加える
11. rotation, 4℃, 2.5hr
12. 蛋白分解阻害剤入りTNE 500ulで4回wash
13. 0.1M Glycine-HCl (pH 2.0) 40ulを加え、Micro mixer (TAITEC, E-36)で撹拌、室温、30min
14. 3xサンプルバッファーを20ul、1M Tris 8ulを加え、インキュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)

CEBPAの抗体架橋による免疫沈降
蛋白Pの抗体架橋による免疫沈降