〇細胞免疫染色 共焦点レーザー顕微鏡 セルデスクを用いる場合

1. ピンセットを70%エタノールに浸け、火であぶり、UVで5min以上。
2. セルデスクLF1 (住友ベークライト, MS-92132)を24ウェルプレートに置き、細胞を播種する。
 ・3T3-L1脂肪細胞:Trypsin/EDTA, R.T., 10min→ピペッティング20回→中和
3. 細胞をPBS 500ulでwash
4. 4% PFA/PBS (nacalai, 09154-85) 250ulを加え、R.T., 10min。
5. PBS 1mlを加え、1min (セルデスクが浮くことがあるので注意)。
6. PBS 1mlを加え、1min以上。
7. 0.1% TritonX/PBS 250ulを加え、R.T., 10min。
8. 0.1% PBST 500ulを加え、1min。
9. 0.1% PBST 500ulを加え、1min。
10. 10% goat serum/0.1% PBST 250ulを加え、R.T., 30min。

非標識一次抗体を用いる場合
蛍光標識一次抗体を用いる場合